微谱第三方检测机构

病毒保存液检测

病毒保存液检测范围

流感病毒、肠道病毒、冠状病毒、疱疹病毒

病毒保存液检测.png

病毒保存液检测项目

病毒核酸稳定性检测,病毒保存效果检测,分子特征检测,荧光PCR检测,毛细管凝胶电泳检测,荧光RT-PCR检测等

病毒保存液检测标准

T/GDMDMA 0005-2022样本保存管(含保存液)

T/SAMD 001—2021《一次性使用病毒采样管》

病毒保存液检测方法

步骤一:细胞培养

将生长状态良好的HEK293T细胞消化计数后稀释***1×104/mL,按照100μL/孔的体积,每个梯度的病毒做三个复孔,计算所需接种孔数,将细胞缓慢均匀接种***96孔板中。放入37℃,5%CO2培养箱中培养过夜。

步骤二:病毒稀释

将病毒滴度为107-108TU/mL的病毒按10倍梯度进行稀释,连续稀释3个梯度。

步骤三:病毒灭活

把稀释好的病毒置于室温条件下,与灭活款病毒保存液按1:1体积比进行混合,置于室温下分别放置1min、5min和10 min进行灭活。

步骤四:终止灭活

采用病毒分离培养基(可用DMEM完全培养基替代)进行1000倍稀释以中和灭活保存液,终止灭活。

步骤五:病毒孵育

将事先培养的HEK293T细胞中吸弃细胞培养基,每孔加入100μL准备好的病毒混合液,和对应的阳性对照、阴性对照。病毒孵育3小时,每隔30分钟从培养箱中取出晃动一次。

步骤六:细胞培养

孵育结束后,将病毒液吸去,每孔中加入100μL DMEM完全培养基,将96孔板置于37℃,5% CO2培养箱中培养,并观察细胞状态。

步骤七:荧光细胞观察与计数

继续培养48-72h,期间观察细胞状态,若细胞培养液变黄,应换液,对荧光细胞个数适量的孔进行计数,计算病毒滴度。

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