病毒保存液检测范围

流感病毒、肠道病毒、冠状病毒、疱疹病毒

病毒保存液检测项目

病毒核酸稳定性检测，病毒保存效果检测，分子特征检测，荧光PCR检测，毛细管凝胶电泳检测，荧光RT-PCR检测等

病毒保存液检测标准

T/GDMDMA 0005-2022样本保存管(含保存液)

T/SAMD 001—2021《一次性使用病毒采样管》

病毒保存液检测方法

步骤一：细胞培养

将生长状态良好的HEK293T细胞消化计数后稀释***1×104/mL，按照100μL/孔的体积，每个梯度的病毒做三个复孔，计算所需接种孔数，将细胞缓慢均匀接种***96孔板中。放入37℃，5%CO2培养箱中培养过夜。

步骤二：病毒稀释

将病毒滴度为107-108TU/mL的病毒按10倍梯度进行稀释，连续稀释3个梯度。

步骤三：病毒灭活

把稀释好的病毒置于室温条件下，与灭活款病毒保存液按1:1体积比进行混合，置于室温下分别放置1min、5min和10 min进行灭活。

步骤四：终止灭活

采用病毒分离培养基（可用DMEM完全培养基替代）进行1000倍稀释以中和灭活保存液，终止灭活。

步骤五：病毒孵育

将事先培养的HEK293T细胞中吸弃细胞培养基，每孔加入100μL准备好的病毒混合液，和对应的阳性对照、阴性对照。病毒孵育3小时，每隔30分钟从培养箱中取出晃动一次。

步骤六：细胞培养

孵育结束后，将病毒液吸去，每孔中加入100μL DMEM完全培养基，将96孔板置于37℃，5% CO2培养箱中培养，并观察细胞状态。

步骤七：荧光细胞观察与计数

继续培养48-72h，期间观察细胞状态，若细胞培养液变黄，应换液，对荧光细胞个数适量的孔进行计数，计算病毒滴度。